רועי לוי החל להופיע על בימות הסטנדאפ כבר בגיל 16, במועדון הקאמל קומדי קלאב אותו רכש לאחר שנים. הוא פרץ לתודעה בזכות השתתפותו בתוכנית "פרפר לילה" לצד טל ברמן. בהמשך השתתף לצד דרור קרן ותומר שרון בתוכנית "של מי השורה הזאת?" ובספיישל "לא נפסיק לצחוק" לצד טל פרידמן ואדיר מילר.

בשנת 2002 עלה על הבמה עם "קרקס הסטנד אפ של רועי לוי" והחל להנחות את התוכנית "דאבל דייט" לצדה של דנה מודן ואת התוכנית "עונת

החתונות" שהשיקו השניים מאוחר יותר. תוכנית סטנד אפ נוספת "רועי לוי עושה סטנד אפ" הגיעה לבמות וזכתה להצלחה גדולה. בהמשך הופיע בתוכניות "אלי נגד העולם" של אלי פיניש, "משחק מכור" לצד גורי אלפי וליאור שליין ו"גלגל החדשות" לצד יאיר ניצבי ומיכל גבריאלוב, "מצב האומה", "קבלו אותם" ואחרות.

בשנת 2010 הצטרף לצוות התוכנית "צחוק מהעבודה" לצד שלום אסייג, ליטל שוורץ, קובי מימון ושחר חסון ועוד. בהמשך החל להנחות את התוכנית "מחוץ לחוק" בערוץ הוט קומדי סנטרל.